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    高中生物选修一生物技术实践 知识点总结 专题一 传统发酵技术的应用 课题一 果酒和果醋的制作 1、发酵:通过微生物技术的培养来生产大量代谢产物的过程。

    2、有氧发酵:醋酸发酵 谷氨酸发酵 ·无氧发酵:酒精发酵 乳酸发酵 3、酵母菌是兼性厌氧菌型微生物真菌 ·酵母菌的生殖方式:出芽生殖(主要) 生殖 孢子生殖 4、在有氧条件下,酵母菌进行有氧呼吸,大量繁殖。

    5、在无氧条件下,酵母菌能进行酒精发酵。

    C6H12O6+6O2→6CO2+6H2O C6H12O6→2C2H5OH+2CO2 6、20℃左右最适宜酵母菌繁殖 酒精发酵时一般将温度控制在 18℃-25℃ 7、在葡萄酒自然发酵的过程中,起主要作用的是附着在葡萄皮表面的野生型酵母菌.在发酵过程中, 随着酒精浓度的提高,红葡萄皮的色素也进入发酵液,使葡萄酒呈现深红色.在缺氧 呈酸性的发 酵液中,酵母菌可以生长繁殖,而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到制约。

    8、醋酸菌是单细胞细菌(原核生物),代谢类型是异养需氧型,生殖方式为二 9、当氧气、糖源都充足时,醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸;当缺少糖源时,醋酸菌将乙醇变 为乙醛,再将乙醛变为醋酸。

    2C2H5OH+4O2→CH3COOH+6H2O 10、控制发酵条件的作用①醋酸菌对氧气的含量特别敏感,当进行深层发酵时,即使只是短时间中 断通入氧气,也会引起醋酸菌死亡。

    ②醋酸菌最适生长温度为 30~35℃,控制好发酵温度,使 发酵时间缩短,又减少杂菌污染的机会。

    ③有两条途径生成醋酸:直接氧化和以酒精为底物的 氧化。

    11、实验流程:挑选葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵→果酒(→醋酸发酵→果醋) 12、酒精检验:果汁发酵后是否有酒精产生,可以用重铬酸钾来检验。

    在酸性条件下,重铬酸钾与 酒精反应呈现灰绿色。

    先在试管中加入发酵液 2mL,再滴入物质的量浓度为 3mol/L 的 H2SO43 滴,振荡混匀,最后滴加常温下饱和的重铬酸钾溶液 3 滴,振荡试管,观察颜色 13、充气口是在醋酸发酵时连接充气泵进行充气用的;排气口是在酒 精发酵时用来排出二氧化碳的;出料口是用来取样的。

    排气口要通过 一个长而弯曲的胶管与瓶身相连接,其目的是防止空气中微生物的污 染。

    开口向下的目的是有利于二氧化碳的排出。

    使用该装置制酒时, 应该关闭充气口;制醋时,应该充气口连接气泵,输入氧气。

    疑难解答 (1)你认为应该先冲洗葡萄还是先除去枝梗?为什么? 应该先冲洗,然后再除去枝梗,以避免除去枝梗时引起葡萄破损,增加被杂菌污染的机会。

    (2)你认为应该从哪些方面防止发酵液被污染? 如:要先冲洗葡萄,再除去枝梗;榨汁机、发酵装置要清洗干净,并进行酒精消毒;每次排气 时只需拧松瓶盖,不要完全揭开瓶盖等。

    (3)制葡萄酒时,为什么要将温度控制在 18~25℃?制葡萄醋时,为什么要将温度控制在 30~35℃? 温度是酵母菌生长和发酵的重要条件。

    20℃左右最适合酵母菌的繁殖。

    因此需要将温度控制在其最 适温度范围内。

    而醋酸菌是嗜温菌,最适生长温度为 30~35℃,因此要将温度控制在 30~35℃。

    课题二 腐乳的制作 1、多种微生物参与了豆腐的发酵,如青霉、酵母、曲霉、毛霉等,其中起主要作用的是毛霉。

    毛 霉是一种丝状真菌。

    代谢类型是异养需氧型。

    生殖方式是孢子生殖。

    营腐生生活。

    2、原理:毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸;脂肪酶可 将脂肪水解为甘油和脂肪酸。

    3、实验流程:让豆腐上长出毛霉→加盐腌制→加卤汤装瓶→密封腌制 4、酿造腐乳的主要生产工序是将豆腐进行前期发酵和后期发酵。

    前期发酵的主要作用:1.创造条件让毛霉生长。

    2.使毛酶形成菌膜包住豆腐使腐乳成型。

    后期发酵主要是酶与微生物协同参与生化反应的过程。

    通过各种辅料与酶的缓解作用,生成腐乳 的香气。

    5、将豆腐切成 3cm×3cm×1cm 的若干块。

    所用豆腐的含水量为 70%左右,水分过多则腐乳不易成 形。

    *水分测定方法如下:精确称取经研钵研磨成糊状的样品 5~10g(精确到 0.02mg),置于已知 重量的蒸发皿中,均匀摊平后,在 100~105℃电热干燥箱内干燥 4h,取出后置于干燥器内冷却 至室温后称重,然后再烘 30min,直至所称重量不变为止。

    样品水分含量(%)计算公式如下: (烘干前容器和样品质量-烘干后容器和样品质量)/烘干前样品质量 ·毛霉的生长:条件:将豆腐块平放在笼屉内,将笼屉中的控制在 15~18℃,并保持一定的温 度。

    来源:1.来自空气中的毛霉孢子,2. 直接接种优良毛霉菌种 时间:5 天 ·加盐腌制:将长满毛霉的豆腐块分层整齐地摆放在瓶中,同时逐层加盐,随着层数的加高而增加 盐量,接近瓶口表面的盐要铺厚一些。

    加盐腌制的时间约为 8 天左右。

    ·用盐腌制时,注意控制盐的用量:盐的浓度过低,不足以抑制微生物的生长,可能导致豆腐 变质;盐的浓度过高会影响腐乳的口味 ·食盐的作用:1.抑制微生物的生长,避免变质 2.析出水分,是豆腐变硬,在后期制作过程 中不易酥烂 3.调味作用,给腐乳以必要的咸味 4.浸提毛酶菌丝上的蛋白酶。

    ·配制卤汤:卤汤直接关系到腐乳的色、香、味。

    卤汤是由酒及各种香辛料配制而成的。

    卤汤中酒 的含量一般控制在 12%左右。

    ·酒的作用:1.防止杂菌污染以防腐 2.与有机酸结合形成酯,赋予腐乳风味 3.酒精含量的高低与 腐乳后期发酵时间的长短有很大关系,酒精含量越高,对蛋白酶的抑制作用也越大,使腐乳成熟期 延长;酒精含量过低,蛋白酶的活性高,加快蛋白质的水解,杂菌繁殖快,豆腐易,难以成 块。

    ·香辛料的作用:1.调味作用 2.杀菌防腐作用 3.参与并促进发酵过程 ·防止杂菌污染:①用来腌制腐乳的玻璃瓶,洗刷干净后要用沸水消毒。

    ②装瓶时,操作要迅速小 心。

    整齐地摆放好豆腐、加入卤汤后,要用胶条将瓶口密封。

    封瓶时,最好将瓶口通过酒精灯的火 焰,防止瓶口被污染。

    疑难解答 (1)利用所学的生物学知识,解释豆腐长白毛是怎么一回事?

    豆腐生长的白毛是毛霉的白色菌丝。

    严格地说是直立菌丝,在豆腐中还有匍匐菌丝。

    (2)为什么要撒许多盐,将长毛的豆腐腌起来? 盐能防止杂菌污染,避免豆腐。

    (3)我们平常吃的豆腐,哪种适合用来做腐乳? 含水量为 70%左右的豆腐适于作腐乳。

    用含水量高的豆腐制作腐乳,不易成形。

    (4)吃腐乳时,你会发现腐乳外部有一层致密的“皮”。

    这层“皮”是怎样形成的呢?它对 人体有害吗?它的作用是什么? “皮”是前期发酵时在豆腐表面上生长的菌丝(匍匐菌丝),对人体无害。

    它能形成腐乳的 “体”,使腐乳成形。

    课题三 制作泡菜 ·制作泡菜所用微生物是乳酸菌 ,其代谢类型是异养厌氧 型。

    在无氧条件下,降糖分解为乳 酸 。

    方式是二。

    反应式为:C6H12O6 ?酶 2C H O +能量 ?? 3 6 3 含抗生素牛奶不能生产酸奶 的原因是抗生素杀死乳酸菌。

    常见的乳酸菌有乳酸链球菌和乳酸杆菌。

    乳酸杆菌常用于生产酸奶。

    ·亚盐为白色粉末,易溶于水,在食品生产中用作食品添加剂。

    ·膳食中的亚盐一般不会危害人体健康,国家规定肉制品中不超过30mg/kg,酱腌菜中不超过 20mg/kg,婴儿奶粉中不超过2mg/kg。

    亚盐被吸收后随尿液排出体外,但在适宜 pH 、温度和 一定微生物作用下形成致癌物质亚硝胺。

    亚 硝 酸 盐 含 量 发酵时间(d) ·一般在腌制 10 天后亚盐含量开始降低, 故在 10 天之后食用最好 *测定亚盐含量的原理是在盐酸酸化条件下, 亚盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后,与 N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料, 与已知浓度的标准显色液目测比较,估算泡菜中 亚盐含量。

    专题二 微生物的培养与应用 课题一 微生物的实验室培养 ·培养基:人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质,是进行微生 物培养的物质基础。

    ·培养基按照物理性质可分为液体培养基 半固体培养基和固体培养基。

    在液体培养基中加入凝固 剂琼脂(是从红藻中提取的一种多糖,在配制培养基中用作凝固剂)后,制成琼脂固体培养基。

    微 生物在固体培养基表面生长,可以形成肉眼可见的菌落。

    根据菌落的特征可以判断是哪一种菌。

    液 体培养基应用于工业或生活生产,固体培养基应用于微生物的分离和鉴定,半固体培养基则常用于 观察微生物的运动及菌种保藏等。

    ·按照成分培养基可分为人工合成培养基和天然培养基。

    合成培养基是用成分已知的化学物质配制 而成,其中成分的种类比例明确,常用于微生物的分离鉴定。

    天然培养基是用化学成分不明的天然 物质配制而成,常用于实际工业生产。

    ·按照培养基的用途,可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基。

    选择培养基是指在培养基中加入 某种化学物质,以抑制不需要的微生物生长,促进所需要的微生物的生长。

    鉴别培养基是根据微生 物的特点,在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的,用以鉴别不同类别的微生物。

    ·培养基的化学成分包括 水 、 无机盐 、 碳源 、 氮源 、生长因子等。

    ·碳源:能为微生物的代谢碳元素的物质。

    如 CO2、NaHCO3 等无机碳源;糖类、石油、花生粉 饼等有机碳源。

    异养微生物只能利用有机碳源。

    单质碳不能作为碳源。

    ·氮源:能为微生物的代谢氮元素的物质。

    如 N2、NH3、NO3 、NH4 (无机氮源)蛋白质、氨基 酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨(有机氮源)等。

    只有固氮微生物才能利用 N2。

    ·培养基还要满足微生物生长对 pH、特殊营养物质以及氧气的要求。

    例如,培养乳酸杆菌时需要 在培养基中添加维生素,培养霉菌时须将培养基的 pH 调至酸性,培养细菌是需要将 pH 调至中性或 微碱性,培养厌氧型微生物是则需要无氧的条件 ·无菌技术·获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵,要注意以下几个方面: ①对实验操作的空间、操作者的衣着和手,进行清洁和消毒。

    ②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。

    ③为避免周围环境中微生物的污染,实验操作应在酒精灯火焰附近进行。

    ④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。

    无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外,还有什么目的? 答:无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。

    ·消毒与灭菌的区别 消毒指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不 包括芽孢和孢子)。

    消毒方法常用煮沸消毒法,巴氏消毒法(对于一些不耐高温的液体)还有化学 药剂(如酒精、氯气、石炭酸等)消毒、紫外线消毒。

    灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物,包括芽孢和孢子。

    灭菌方法有灼 烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。

    灭菌方法: ①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法; ②玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法,所用器械是干热灭菌箱 ; ③培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法,所用器械是高压蒸汽灭菌锅 。

    ④表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法,所用器械是紫外灯 。

    比较项 消毒 灭菌 理化因素的作用强度 较为温和 强烈 消灭微生物的数量 部分生活状态的微生物 全部微生物 芽孢和孢子能否被消灭 不能 能 + 制作牛肉膏蛋白胨固体培养基 (1)方法步骤:计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。

    (2)倒平板操作的步骤: ①将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上,右手拿装有培养基的锥形瓶,左手拔出棉塞。

    ②右手拿锥形瓶,将瓶口迅速通过火焰。

    ③用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙,右手将锥形瓶中的培养基(约

    10~20mL)倒入培养皿,左手立即盖上培养皿的皿盖。

    ④等待平板冷却凝固,大约需 5~10min。

    然后,将平板倒过来放置,使培养皿盖在下、皿底 在上。

    ·倒平板操作的讨论 1.培养基灭菌后,需要冷却到 50℃左右时,才能用来倒平板。

    你用什么办法来估计培养基的温 度? 提示:可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶,感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时,就可以进 行倒平板了。

    2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰? 答:通过灼烧灭菌,防止瓶口的微生物污染培养基。

    3.平板冷凝后,为什么要将平板倒置? 答:平板冷凝后,皿盖上会凝结水珠,凝固后的培养基表面的湿度也比较高,将平板倒置,既 可以使培养基表面的水分更好地挥发,又可以防止皿盖上的水珠落入培养基,造成污染。

    4.在倒平板的过程中,如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位,这个平板还能用来培养微 生物吗?为什么? 答:空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生,因此最好不要用这个平板培养微 生物。

    纯化大肠杆菌 (1)微生物接种的方法最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。

    (2)平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作。

    将聚集的菌种逐步稀释分 散到培养基的表面。

    在数次划线后培养,可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群 体,这就是菌落。

    (3)稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂 固体培养基的表面,进行培养。

    分为系列稀释操作和涂布平板操作两步。

    (4)用平板划线法和稀释涂布平板法接种的目的是:使聚集在一起的微生物分散成单个细胞,从 而能在培养基表面形成单个的菌落,以便于纯化菌种。

    (5)平板划线法操作步骤: ①将接种环放在火焰上灼烧,直到接种环烧红。

    ②在火焰旁冷却接种环,并打开棉塞。

    ③将试管口通过火焰。

    ④将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液。

    ⑤将试管通过火焰,并塞上棉塞。

    ⑥左手将皿盖打开一条缝隙,右手将沾有菌种的接种环迅速 伸入平板内,划三至五条平行线,盖上皿盖。

    注意不要划破培养皿。

    ⑦灼烧接种环,待其冷却后, 从第 一区域划线的末端开始往第二区域内划线。

    重复以上操作,在三、四、五区域内划线。

    注 后一区的划线与第一区相连。

    ⑧将平板倒置放入培养箱中培养。

    意不要将最 ·平板划线操作的讨论 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环?在划线操作结束时,仍然需要灼 烧接种环吗?为什么? 答:操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物;每次划线前 灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后,接种环上残留的菌种,使下一次划线时,接种环上的菌种 直接来源于上次划线的末端,从而通过划线次数的增加,使每次划线时菌种的数目逐渐减少,以便

    得到菌落。

    划线结束后灼烧接种环,能及时杀死接种环上残留的菌种,避免细菌污染环境和感染操 作者。

    2.在灼烧接种环之后,为什么要等其冷却后再进行划线? 答:以免接种环温度太高,杀死菌种。

    3.在作第二次以及其后的划线操作时,为什么总是从上一次划线的末端开始划线? 答:划线后,线条末端细菌的数目比线条起始处要少,每次从上一次划线的末端开始,能使细 菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少,最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。

    (6)涂布平板操作的步骤: ①将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。

    ②取少量菌液,滴加到培养基表面。

    ③将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃,待酒精燃尽后,冷却 8~10s。

    ④用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。

    涂布平板操作的讨论 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。

    结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求,想一 想,第 2 步应如何进行无菌操作? 提示:应从操作的各个细节保证“无菌”。

    例如,酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要 接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围;等等。

    菌种的保存 (1)对于频繁使用的菌种,可以采用临时保藏的方法。

    ①临时保藏方法 将菌种接种到试管的固体斜面培养基上,在合适的温度下培养。

    当菌落长成后,将试管放入 4℃的冰箱中保藏。

    以后每 3~6 个月,都要重新将菌种从旧的培养基上转移到新鲜的培养基上。

    ②缺点:这种方法保存的时间不长,菌种容易被污染或产生变异。

    (2)对于需要长期保存的菌种,可以采用甘油管藏的方法。

    在 3mL 的甘油瓶中,装入 1mL 甘油后灭菌。

    将 1mL 培养的菌液转移到甘油瓶中,与甘油充分混 匀后,放在-20℃的冷冻箱中保存。

    疑难解答 (1)生物的营养 营养是指生物摄取、利用营养物质的过程。

    营养物质是指维持机体生命活动,保证发育、生殖 所需的外源物质。

    人及动物的营养物质:水、无机盐、糖类、脂质、蛋白质、维生素六类。

    植物的营养物质:矿质元素、水、二氧化碳等三类。

    微生物的营养物质:水、无机盐、碳源、氮源及特殊营养物质五类。

    (2)确定培养基制作是否合格的方法 将未接种的培养基在恒温箱中保温 1~2 天,无菌落生长,说明培养基的制备是成功的,否则 需要重新制备。

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